牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：牛腺病毒 3 型（BAV-3）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name：Bovine Adenovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包裝規格】50T/盒

【預期用途】

牛腺病毒 3 型（BAV-3）是引起牛呼吸道疾病的主要病原體之一，特別是新生犢牛。臨床癥狀包括發(fā)燒，呼吸困難，鼻腔和眼結膜有分泌物等。病理變化主要出現在肺部，具有鮮明的肺小葉、肺氣腫和突變。血清學(xué)調查表明該病廣泛分布于世界各地，給養牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。

本試劑盒適用于檢測肺組織、呼吸道及眼鼻分泌物等樣本中的牛腺病毒 3 型，用于牛腺病毒 3 型感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè )▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設計一對牛腺病毒 3 型基因保守區特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對牛腺病毒 3 型基因保守區的 DNA 進(jìn)行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

捕殺牛：取肺部病變組織，5g；活牛：用滅菌棉拭子沾取牛氣管或眼鼻分泌物，然后置于裝有 0.5mL 生理鹽水的離心管中。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長(cháng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融。

1. 樣品處理（樣本處理區）

取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。核酸提取

1.3 核酸提取采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法），請嚴格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照；樣品每滿(mǎn) 10份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

1. 結果分析判定

1.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析，當曲線(xiàn)出現整體傾斜時(shí)，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照)，重新分析結果。

1.2 結果判斷

陽(yáng)性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn)；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線(xiàn)有明顯的增長(cháng)曲線(xiàn)， 判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

2. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗視為無(wú)效。

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；檢驗過(guò)程中，參照《GB/T 27403 實(shí)驗室質(zhì)量控制規范 食品分子生物學(xué)檢測》的規定進(jìn)行。

? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；

? 反應液應避光保存；

? 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區工作服；

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進(jìn)行，以免交叉污染；

? 實(shí)驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全   通則》進(jìn)行處理。

滬崢PCR優(yōu)勢：

   1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保
所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢測。

   2.   重現性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證。

   3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現對其的直接檢測，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。

   4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。